一般描述
在所有需要标准化ROX的实时PCR系统上用于qPCR和RT-qPCR的通用即用型热启动反应预混液。
FastStart™ Universal SYBR Green Master (Rox)含有一种全新的参考染料,使其能够在所有需要标准化ROX的实时PCR仪器上使用,而无需对特定的仪器或方案进行修改或调整。这种即用型的2x浓度预混液含有以水解探针检测形式进行实时DNA检测量化分析所需的所有试剂,包括qPCR和两步法qRT-PCR。FastStart™ Universal Probe Master (Rox)可在诸如Applied Biosystems 7900 HT Fast Real-Time PCR或Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR系统等仪器上生成理想的结果。该产品不可用于LightCycler®仪器。
结果表明,热启动方案可显著提高PCR的特异性、敏感性和产量。在FastStart ™Taq DNA聚合酶的某些氨基酸残基上的不耐热保护基使得钝化酶在室温下失去活性。因此,在引物可以非特异性结合的阶段并没有发生延伸。FastStart™ Taq DNA聚合酶可在高温(如在+95°C的预培养步骤)下通过去除保护基去而予以激活。
应用
使用FastStart™通用探针预混液(Rox):
用于TaqMan®实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR),以量化内源性miRNA,例如MIR376B、MIR376A和MIR181A
用于逆转录酶(RT-PCR),以研究肿瘤坏死因子(TNF)在未分化外周炎性关节炎(UPIA)患者整个滑膜组织中的表达
用于任何DNA或cDNA靶标的扩增和检测,包括通过量化PCR富含GC或AT的。
将预混液与Transcriptor First Strand cDNA合成试剂盒(Roche)结合以在两步法qRT-PCR中实现极-佳的结果。
pkg of 5000 x 20 μL reactions