一般描述
检测时间：145分钟
样品材料
线性化质粒DNA
PCR产物
原理
DIG RNA标记试剂盒可产生已知长度的DIG标记单链RNA 探针。SP6或T7 RNA聚合酶都可在体外对来自模板DNA（在地-高辛-UTP存在情况下）对这些探针进行转录。
RNA标记通过体外转录完成
待转录的DNA被克隆至含有SP6及T7 RNA聚合酶的合适转录载体的多接头位点（如pSPT 18或19）。相邻的模板DNA在合适的位点进行线性化而RNA聚合酶用于生成“流失的”转录本。DIG-UTP被插入至转录本中。新合成RNA的每个第20至25个核苷酸都是DIG-UTP。由于核苷酸的浓度在标准转录反应中并不会成为限制，该反应可生成大量的标记RNA。
试剂盒用于通过SP6和T7聚合酶进行的体外转录而实现基于地高辛-UTP的RNA标记。通过这种方法，已知长度的单链RNA探针被生成，而这可用于多种杂交技术中。
特异性
灵敏度及特异性
DIG标记的RNA探针可在低至1 μg的哺乳动物DNA中按照以下的检测条件进行单拷贝基因的检测：该杂交混合液包含20至100 ng标记探针/ml，而结合的探针可通过抗DIG-AP进行检测并通过化学发光底物CDP-Star进行可视化。
热灭活：添加 2 μl 0.2 M EDTA (pH 8.0) 终止反应。
应用
用于利用SP6及T7 DNA聚合酶通过体外转录而使用DIG-11-UTP进行RNA标记。DIG标记的“流失”转录本是以高效率进行合成的，并用于多种杂交技术：
Northern blots
Southern blots
原位杂交
菌斑或克隆提升
RNase保护试验
sufficient for 2 x 10 labeling reactions
