Thermo Scientific LightShift 化学发光 EMSA 试剂盒是一种非常可靠且灵敏的系统,用于执行电泳迁移率位移测定 (EMSA) 以鉴定和表征蛋白质-DNA 结合相互作用。该试剂盒包括用于设置和定制 DNA 结合反应的试剂、用于测试试剂盒系统的 DNA 和蛋白质提取物对照集、用于探测生物素标记的 DNA 靶标的稳定链霉亲和素-HRP 偶联物,以及用于检测的极其灵敏的化学发光底物模块。
LightShift 化学发光 EMSA 试剂盒的特点:
• 非常适合检测核提取物
中的低丰度蛋白质• 灵敏度超过放射性和地高辛方法
• 与先前建立的流行 DNA-蛋白质相互作用
的结合条件兼容• 包括 EBNA 控制系统,可帮助新用户开发有效的检测方法,并了解用于确认结合相互作用特异性
的方法 LightShift EMSA 检测的原理类似于蛋白质印迹。将生物素末端标记的双链DNA与核提取物或纯化因子一起孵育,并在天然凝胶上电泳。然后将 DNA 快速(30 分钟)转移到阳性尼龙膜上,UV 交联,用链霉亲和素-HRP 偶联物探针并与底物一起孵育。从标记到结果的方案可以在一天内完成。
蛋白质与 DNA 的相互作用是控制许多细胞过程的核心,包括 DNA 复制、重组和修复、转录和病毒组装。研究基因调控和确定蛋白质:DNA 相互作用的一种核心技术是电泳迁移率位移测定 (EMSA)。
EMSA技术基于以下观察结果:蛋白质:DNA复合物在进行非变性聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳时比游离DNA分子迁移得更慢。由于 DNA 迁移速率在蛋白质结合时会移动或延迟,因此该测定也称为凝胶移位或凝胶延迟测定。在EMSA蛋白:DNA相互作用的概念之前,主要通过硝酸纤维素过滤器结合测定进行研究。
进行检测所需的只是纯化的DNA靶标,该靶标已用生物素、待测蛋白质提取物、尼龙膜和碱性电泳设备进行末端标记。DNA 靶标可以用 5' 或 3' 生物素标记合成,也可以在合成后使用 Thermo Scientific 生物素 3' 末端 DNA 标记试剂盒(货号 89818)进行标记。核蛋白、胞质蛋白或全细胞蛋白提取物可通过多种方法获得,包括 Thermo Scientific NE-PER 核和细胞质提取试剂盒(货号 78833)。