Thermo Scientific Pierce 抗-DYKDDDDK 磁性琼脂糖是一种从体外蛋白表达系统、细菌、酵母菌和哺乳动物细胞中进行 DYKDDDDK 标签蛋白纯化和免疫沉淀 (IP) 的快速便捷方法。氨基酸序列 DYKDDDDK(通常称为 FLAG)被高亲和力大鼠单克隆抗体(克隆 L5)识别,该抗体与磁石嵌入的琼脂糖核心颗粒共价连接。
对于蛋白纯化,将磁性琼脂糖添加到含有 DYKDDDDK 标签蛋白的样品中,其中标签位于 N 或 C 端。然后,将捕获的蛋白与上清液磁性分离,洗去非特异性结合蛋白,然后用洗脱缓冲液分离结合的 DYKDDDDK 标签蛋白。使用磁力架或 KingFisher Flex 磁粒子处理器等仪器从溶液中去除磁性琼脂糖。自动仪器对于更高通量的纯化和纯化条件筛选特别有用。
特点包括:
特异性 — 独特的碱基微珠和高特异性抗体可较大限度地减少脱靶结合(低非特异性结合)
高纯度 — 优化的结合-洗涤-洗脱方案可以实现高纯度
高得率 — 特殊抗体偶联方法可实现高得率
快速 — 整个纯化方案通常只需不到40分钟
经济 — 纯化方案能够多次重复使用
通用 — 微珠兼容手动和自动化工作流程(例如 KingFisher 仪器)
Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖的特性:
组成:抗 DYKDDDDK 抗体与磁性、高度交联的琼脂糖载体共价连接
磁化:亚铁磁性,剩磁较低
微珠大小:10–40 µm
微珠浓度:25% 浆液(溶于磷酸盐缓冲盐水)、0.01% Tween-20 去污剂、0.02% 叠氮化钠,pH 值为7.2
结合能力:≥3.2 mg DYKDDDDK-tGFP-His 蛋白 (∼32 kDa)/mL 沉淀微珠